一.实验目的
了解血液的缓冲能力及血液中的各种缓冲成分的主要功能。
二.实验原理
血浆中的缓冲液
NaHCO3/H2CO3,Na2HPO4/NaH2PO4,Na-血浆蛋白/H-血浆蛋白
红细胞中的缓冲系统
K-Hb/H-Hb K-HbO2/H-HbO2 K2HPO4/KH2PO4 KHCO3/H2CO3
以上缓冲对中,在血浆中以碳酸氢盐缓冲对为主,在红细胞中以血红蛋白缓冲液为主,进入血液的固定酸(非挥发性酸),则主要由血浆中的缓冲对为主,而非挥发性酸则由红细胞的缓冲液为主。根据以上实验原理,我想设计以下实验证明:(1)血浆,红细胞都有一定的缓冲能力。(2)红细胞以对挥发性酸缓冲对为主。
三.实验药品及仪器
肝素,离心机,乳酸,离心管,碳酸,PH计,酸式滴定管,烧杯(50ml,8只),铁架台
四.实验对象
新鲜哺乳动物血液(可用别组的动物实验完成后采血)
五.实验步骤
1.去8只50ml的小烧杯,编号1-8。
2.取80ml新鲜血液加入肝素防凝,平均分为4份,一份放入1号杯,一份放入2号杯,另两份放入两根离心管中。
3.离心4000rpm,15min.将红细胞和血浆分开(虽然在该步中白细胞也会沉淀下来,但是就缓冲能力方面白细胞针对红细胞而言可以忽略不计,原因:在整体的缓冲能力中红细胞占18%。白细胞占3%。)
4.将离心后的血浆部分放入3号,4号杯中,红细胞经生理盐水一次洗涤后放入5号。6号杯中,然后往3-8号杯中加入适量的生理盐水使1-8号杯中的物质总体积相等。
5.按下表加酸,并记录PH值的变化
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1(全血)
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2(全血)
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3血浆
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4(血浆)
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5(血细胞)
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6(血细胞)
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7(生理盐水)
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8(生理盐水)
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乳酸
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V1
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V3
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V5
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V7
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碳酸
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V2
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V4
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V6
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V8
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其中V1,V2,为往全血中加入乳酸和碳酸后,PH变化量ΔPH=0.3时的乳酸和碳酸的体积。ΔPH为多少示实验而定,这里定ΔPH=0.3的,理由是当全血ΔPH=0.3时,将相同体积的酸加入纯血浆中时,血浆红的[H]可上升800倍!
六.实验结果的预测
利用实验原理可得:V1〉V3〉V5〉V7 、 V2〉V6〉V4〉V8 且V3-V5〉V6-V4
结论:
(1)由V1〉V3〉V5〉V7和V2〉V6〉V4〉V8可知血浆和红细胞均有缓冲能力。
(2)由V3〉V5,V6〉V4可知道在对固定酸发挥缓冲作用时血浆中的缓冲对起主要作用。而对挥发性酸则由红细胞起主要的缓冲作用。
(3)由V3-V5〉V6-V4可知道,在全血中血浆的缓冲能力比红细胞的缓冲能力强。
七、参考文献
杨秀平 动物生理学 高等教育出版社
在中国期刊网镜像站点和维普中文科技期刊全文数据库输入血液的缓冲能力及红细胞的缓冲能力未能查到相关资料。