实验目的:观察马齿苋各种提取物对离体子宫平滑肌收缩的影响。
学习离体子宫的实验方法。
实验设计意义:目前就中药的认识来说,有些未认识到其药理作用,而有些原本没有其所说的那样,却过度的认为它的疗效。马齿苋是一种随处可见的野生植物,目前有许多药物公司报道其有几十种生理功能及临床应用,本实验从其诸多生理功能中选择一个,就其所说设计实验,来证明马齿苋是否具有此功能。选择马齿苋对子宫平滑肌的作用,是由于其适合于用生理实验方式解决,而其他许多功能如抗病毒、抗衰老等不适于用生理实验手段证明。
实验原理:
马齿苋为马齿苋科植物马齿苋Portukaca oleracea L的全草,为1年生肉质草本,分布于全国大部分地区,生长于田野、荒芜地及路旁,全株光滑无毛。全草含大量去甲肾上腺素(Noradrenaline,2.5mg/g鲜草)和多量钾盐(硝酸钾、氯化钾、硫酸钾等),另含多巴胺(Dopamine,二羟基苯乙胺)、多巴(DOPA,二羟基苯丙氨酸)。
鲜马齿苋汁或马齿苋提取物对离体及在体子宫有收缩作用。产妇口服鲜马齿苋汁6—8ml,可见子宫收缩次数增多,强度增加。鲜马齿苋汁对豚鼠、大鼠、家兔的离体子宫有明显的兴奋作用。2ml鲜马齿苋汁对子宫的收缩作用比0.2mg麦角新碱强、4—6 ml与10U垂体后叶素作用强度相似。马齿苋的水煎醇沉提取液收缩子宫的作用最强,碱性水提取醇沉液对子宫有抑制作用。
马齿苋提取物对离体子宫的兴奋作用是通过子宫肌上的H1受体所致,与M受体和a 受体无关。
实验动物:150—200g未孕雌性大白鼠
实验药品:
鲜马齿苋汁8ml、麦角新碱0.2mg、垂体后叶素10U、马齿苋水煎醇沉提取液、碱性水提取醇沉液、雌二醇、台氏液
仪器与器械:
平滑肌槽、生物信号记录分析系统、张力传感器、常规手术器械一套、注射器
实验方法与步骤:
1、实验准备
(1)取体重150—200g未孕雌性大白鼠一只,于实验前24小时腹腔注射雌二醇0.1mg/kg,使动物处在动情期。
(2)平滑肌槽 向中央标本槽内加入台氏液至浴槽高度的2/3处,开启电源,恒温工作点定在38℃。
(3)标本制备 将大白鼠采用颈椎脱臼法处死,从腹正中线剪开下腹部,用眼科镊轻轻将脂肪、肠和肠系膜拨向两侧,在膀胱和直肠之间找到“V”形子宫,其颜色呈红色,在子宫底两端与卵巢相连,“V”形子宫下端连接宫颈使之呈固定状态且无系膜附着。确认子宫后,从子宫颈处剪断,并分成对应的两段,将游离子宫放入盛有台氏液的培养皿中,然后取一侧子宫,将一端固定于标本架的小钩上,另一端连接在张力传感器的应变梁上,置于含台氏液的玻璃槽内,通入95%氧气和5%二氧化碳,温度恒定在38℃。
(4)仪器连接与调试 张力换能器输入端与生物信号记录分析系统的通道相连,进入系统,选择实验项目,给标本负荷1g的静息张力,平衡30min后,开始实验,计算机系统记录。
2、实验项目
(1)观察、记录38℃台氏液中子宫收缩曲线,即子宫正常收缩曲线。
(2)记录一段正常曲线,加入鲜马齿苋汁2ml,观察并记录前、后子宫收缩曲线的变化。在观察到明显的作用后,用新鲜38℃台氏液冲洗3次。
(3)待曲线稳定后,加入0.2mg麦角新碱,观察并记录给药前、后子宫收缩曲线的变化。
在观察到明显的作用后,用新鲜38℃台氏液冲洗3次。
(4)待曲线稳定后,加入4ml鲜马齿苋汁,观察、记录子宫收缩曲线的变化。在观察到明显的作用后,用新鲜38℃台氏液冲洗3次。
(5)待曲线稳定后,加入10U垂体后叶素,观察、记录子宫收缩曲线的变化。在观察到明显的作用后,用新鲜38℃台氏液冲洗3次。
(6)待曲线稳定后,加入适量马齿苋水煎醇沉提取液,观察并记录前、后子宫收缩曲线的变化。在观察到明显的作用后,用新鲜38℃台氏液冲洗3次。
(7)待曲线稳定后,加入适量碱性水提取醇沉液,观察并记录前、后子宫收缩曲线的变化。
实验结果处理:
1、 利用生物信号记录分析系统测定每个实验项目中的舒张最低点、收缩最高点、每分钟收缩次数。
2、 计算每个实验项目中的子宫活动力。收缩张力以每次舒张的最低点表示;收缩强度以每次收缩所达最高点表示;收缩频率以每分钟收缩的次数表示;子宫活动力以收缩强度和收缩频率的乘积表示。
3、 7个实验项目中,后6项都要与第一项正常收缩曲线及正常子宫活动力比较。且第二项与第三项,第四项与第五项,第六项与第二、四项,第七项与前七项均要进行比较。
实验结果预测:
1、 实验项目第一项,得到正常子宫收缩曲线。
2、 第2—6项,从收缩曲线看,会看出子宫的收缩作用比正常情况下增强。其中第二项与第三项比较,2ml鲜马齿苋汁对子宫的收缩作用比0.2mg麦角新碱强;第四项与第五项比较,4 ml鲜马齿苋汁与10U垂体后叶素作用强度相似;第六项,马齿苋的水煎醇沉提取液对子宫的收缩作用最强。
3、 第七项,应从收缩曲线中发现,碱性水提取醇沉液对子宫有抑制作用。
注意事项:
1、 避免对标本用力牵拉或过度刺激。
2、 槽内台氏液的量,应没过子宫平滑肌,略高于平滑肌顶。
3、 注意温度控制,加药前,要先准备好更换用的新鲜38℃台氏液,每个实验项目结束后,应立即用38℃台氏液冲洗,待平滑肌活动恢复正常后,再进行下一个实验项目。
4、 若加入药物后,效果不明显,可以增补剂量,但要防止一次性加药过量。因为,用马齿苋提取液大剂量或多次给药,均不会引起子宫肌强直收缩,只是当给药量超过一定值时子宫肌的活动由兴奋转为抑制,用营养液冲洗,抑制即被解除,子宫活动又恢复正常。
参考文献:
杨秀平. 动物生理学实验. 高等教育出版社
杨秀平. 动物生理学. 高等教育出版社
肖向红. 动物生理学. 东北林业大学出版社
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